浙江耐低温生物菌种厂家诚信企业「北京开碧源」

楼主:北京开碧源  时间:2021-08-03 21:07:36
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低温生物菌种的保存方法

低温保存法

①简单保存法,将琼脂斜面孢子培养物、菌丝悬浮液以及由麸皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培养物置于4℃冰箱保存,保存时间不超过1~2个月,若将谷物原料制备的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蜡,以隔绝外界空气和水汽,保持时间可达3~4个月;

②液氮超低温保存法,将生长稳定期的细胞悬浮在10%甘油或其他低冰点液体中,密封于安瓿管内,然后控制冷却速度,使安瓿管温度逐步下降至 -35℃时,即可置于-150~-196℃的液氮罐中保存。大多数微生物如病毒、噬菌体、多种细菌、酵母和原虫、特别是一些用冷冻干燥法有困难的微生物,都可用此法长期保存。

低温生物菌种——菌种分离方法介绍

孢子分离又可分为以下几种方法:

( 1 )褶上涂抹法:选取新鲜、健壮、未开伞、未裂破的子实体,洗净后用75 %酒精表面灭菌2 分钟,然后连同培养基一起放入接种箱内,经熏蒸消毒12 ~ 24 小时,再按无菌操作技术将接种环在子实体菌褶上涂抹,把涂抹后带孢子的接种环在培养基上划线接种,,后置于25 ~ 28 ℃恒温箱内培养,可得纯菌种。

( 2 )孢子印采集法:取灭过菌的载玻片、试纸或黑布,置于新鲜、未开伞或未开裂的子体菌褶的下方。经24 小时后,便落下孢子,形成印痕(即孢子印)。然后,用接种环或玻璃棒蘸取孢子,接种在平面或斜面培养基上,进行恒温培养,可得纯菌种。

( 3 )孢子收集器采集法:孢子收集器由玻璃钟罩、培养皿、三角架、搪瓷盘等组成。钟罩下为一搪瓷盘,直径25 厘米左右,盘内先垫衬4~6 层纱布,中央放1 副9 厘米直径的培养皿,大盖口朝下,上放小的,口向上。然后,在上面小的培养皿上放1 只铅丝绕成的三角架,再将带孔的玻璃钟罩盖上,顶上罩孔用棉塞塞好,用纱布包好整个孢子收集器,置于高压灭菌锅或蒸笼内灭菌2小时。

孢子收集器灭菌消毒后,放入无菌室或无菌箱内。然后,用小刀割取1 块4~5 厘米大小的子实体,插在收集器内的三角架顶上(若无孢子收集器,也可用培养皿代替)。再置于温度24 ~26 ℃下培养24 小时,培养皿中便可见到白色粉状物,此即为孢子。此时,可将孢子收集器再移至接种箱内,取出培养皿,盖好,并在培养皿内加入10 ~ 20 毫升的无菌水,使孢子散于本中,成为孢子悬浮液。然后,再用无菌打针筒或吸管吸取孢子悬浮液,接种于试管斜面培养基上,每管注2 ~ 3 滴。置于24 ~ 26 ℃温度下培养5 ~ 7 天,培养基上便可长出白色菌落。待菌落直径有0 . 5 厘米时,选健壮的菌落,再移接于另一试管的斜面培养基上培养。当白色菌丝长满试管时,便得纯菌种。

低温生物的设备

耐低温的中试设备,冰下水温适用于3.5度(保持在5度左右),COD、氮和磷的去除率依然非常高,经连续取样检测,污水中的COD、总磷和氨氮的降解率分别达 67%、56%和70%.中试非常成功。经中试验证:耐低温,在水温3.5度时,微生物活性依旧非常高,各项指标去除率都达到50%以上,是中温微生物无法比拟的。

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